艱難梭菌毒素A+B抗原檢測 ELISA操作孵育過程常見問題及解答
1） 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；
2） 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。 3）孵育溫度未按照說明書要求進行，溫度過高或過低；
解決辦法：
1） 貼封片或加蓋；
2） 按說明步驟嚴格控制操作時間和孵育溫度。 通用名稱：艱難梭菌毒素A+B抗原檢測
英文名稱：C. difficile toxin A+B antigen detection
公司品牌：德國DRG
儲存條件：2-8℃
檢測方法：ELISA方法
預期用途：用于定性檢測糞便和細胞上清液中的艱難梭菌毒素A+B抗原。
參考價格：詢價
產(chǎn)品貨號：EIA-4448
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測樣本：糞便、細胞上清液
供應商家：深圳市科潤達生物工程有限公司
艱難梭菌毒素A+B抗原檢測試劑盒預期用途
艱難梭菌毒素A+B抗原檢測僅用于體外檢測，定性檢測糞便和細胞上清液中的艱難梭菌毒素A+B抗原。
艱難梭菌簡介
艱難梭菌是人類腸道內的正常菌群，如果過度服用抗生素，艱難梭菌就會變成致病菌。Hall 和 O’Toole在1935年將此菌分類到了可產(chǎn)生毒素的菌群中。艱難梭菌的毒素株會產(chǎn)生兩類毒素：毒素A，腸毒素；毒素B，細胞毒素。直到1970后期，人們發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌與偽膜性腸炎有所關聯(lián)時才確定艱難梭菌是致病菌。偽膜性腸炎是一類與抗生素相關聯(lián)的疾病，主要發(fā)生腹瀉和急性粘膜壞死性炎癥，從而形成由纖維蛋白、粘液層、壞死上皮細胞和白血球構成的克隆偽膜性腸炎。
盡管在50%多的無癥狀克隆嬰兒患者的糞便中發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌毒素，而且還有高濃度的毒素A和毒素B，但是只有少數(shù)會最終患有PMC（偽膜性腸炎），剩余的都是無癥狀的。對于這種現(xiàn)象可能的原因包括：母乳能夠中和毒素A和毒素B，胎兒腸細胞對毒素A的敏感度降低，或者是缺乏毒素受體。少數(shù)病例顯示，囊性纖維變性患者對PMC（偽膜性腸炎）敏感度降低。診斷抗生素與結腸炎相關的普遍的臨床方法是細胞培養(yǎng)和乳膠凝集試驗。
細胞培養(yǎng)試驗可以發(fā)現(xiàn)毒素B對細胞的一個影響作用，這個試驗的敏感度很高（50pg/ml毒素B），但是最少也要2天才可以完成。乳膠凝集是一種可以通過糞便來篩查出與艱難梭菌相關聯(lián)的蛋白質的方法，即使交叉反應和不會產(chǎn)生毒素的艱難梭菌也會被檢測出來。很多研究者已表明酶聯(lián)免疫法可以檢測出1-10ng/ml的毒素A或是毒素B。
艱難梭菌毒素A+B抗原檢測原理
檢測糞便中的艱難梭菌毒素A+B抗原利用的是夾心法。糞便或者細胞上清液中的艱難梭菌和陽性質控與包被孔中的單克隆抗毒素A和B抗體反應，溫育后，未連接的成分被洗滌除去。然后在第二次溫育中連接到包被孔的毒素會特異性地與生物素化的多克隆抗毒素A和B抗體反應，未連接的材料會被洗滌除去。
在下一步的溫育中，辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素會與生物素化的抗體反應，經(jīng)洗滌步驟除去未連接酶聯(lián)物。然后加入底物顯色液TMB，顯藍色，加入終止液終止反應，溶液由藍色變成了黃色。在酶標儀上讀取吸光度，吸光度直接與艱難梭菌毒素A和B的量成正比例。經(jīng)與臨界值比較，可以判定結果為陽性或者陰性。
艱難梭菌毒素A+B抗原檢測試劑盒組成 | 名稱 | 描述 | 標志 | | 反應板 | 含有抗艱難梭菌毒素A+B抗體的96孔板 | MT PLATE | | 濃縮洗滌液 (10X) | 100 ml濃縮緩沖液（10倍濃縮），可稀釋至1000ml。白蓋 | WASH BUF | | 樣本稀釋液 | 100ml，即用，紅色，黑蓋 | DIL | | 陽性質控品 | 2 ml 艱難梭菌陽性樣本，即用，藍色，黑蓋 | CONTROL + | | 陰性質控品 | 2ml 艱難梭菌陰性樣本，即用，藍色，綠蓋 | CONTROL – | | 生物素化的抗體 | 生物素化的多克隆抗毒素A和B抗體（兔）
15 ml，即用，綠色，白蓋 | CONJ BIOTIN | | 酶聯(lián)物 | 15ml鏈霉親和素標記的辣根Catalase，即用，紅色，棕色蓋 | CONJ STREPT | | 顯色液 | 15 ml TMB顯色和hydrogen peroxide，即用，藍蓋 | SUBS TMB | | 終止液 | 15 ml 0.25 M流酸，即用，黃蓋 | SOLN |
艱難梭菌毒素A+B抗原檢測試劑的制備和保存
各成分的有效期見于各自的標簽，完整的試劑盒有效期見于盒子標簽。收到試劑盒后，放在原始的試劑盒箱子里于2-8℃保存。所有的成分開瓶后，在適當?shù)谋４鏃l件下，至少可以穩(wěn)定2個月。稀釋后的洗滌緩沖液在2-8℃，至少可以保存1個月。
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