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胰島素（大鼠超敏）ELISA檢測(cè)試劑盒

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【樣品要求】

胰島素elisa檢測(cè)試劑盒(大鼠)可使用血清也可使用血漿作為樣品。

不能使用明顯溶血﹑黃疸和脂血的樣品。

血清：靜脈穿刺采集全血，待其凝血，在室溫下離心分離血清。

血漿：將全血采集到含有抗凝劑的離心管，采集后立即離心分離。

樣品的儲(chǔ)存

樣品蓋好蓋子后，可在實(shí)驗(yàn)前2-8℃下儲(chǔ)存5天，要更長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，應(yīng)在-20℃下凍存。在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品。

樣品的稀釋

在第一次實(shí)驗(yàn)中，要是樣品的濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)品，則樣品應(yīng)用按實(shí)驗(yàn)步驟所描述的10倍或100倍稀釋。在計(jì)算濃度時(shí)需乘以此稀釋度。

例子：

a） 按1：10稀釋： 10μL的血清+90μL的零標(biāo)準(zhǔn)品（充分搖勻）。

b） 按1：100釋稀：10μL按a）稀釋的血清+90μL的零標(biāo)準(zhǔn)品（充分搖勻）

檢測(cè)步驟

所有的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品都必須做雙份檢測(cè)以確保所有微孔的檢測(cè)條件都一樣。

1）將所需數(shù)目的板條置于板架上。。

2）用一次性吸嘴將標(biāo)準(zhǔn)品﹑質(zhì)控品和樣品分別25μL加入相應(yīng)的檢測(cè)孔中。

3）每孔加入25μL的酶聯(lián)物。

4）充分混合10秒，在此步驟中充分混合非常重要。

5）室溫下溫育30分鐘。

6）快速棄去檢測(cè)孔中的內(nèi)含物，每孔加入400μL的洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍干以除去殘余液體。注意：洗板步驟是否正確操作會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和精確度。

7）每孔加入50μL的酶復(fù)合物。

8）在室溫下溫育30分鐘。

9）快速棄去檢測(cè)孔中的內(nèi)含物，每孔加入400μL的洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍干以除去殘余液體。

10）每孔加入50μL的底物液。

11）在室溫下溫育15分鐘。

12）每孔加入50μL的終止液終止反應(yīng)。

13）在加終止液后10分鐘內(nèi)于450±10nm處讀取OD值。

【結(jié)果計(jì)算】

1) 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品﹑質(zhì)控品和病人樣品的平均吸光度。

2) 以吸光率為Y軸，濃度為X軸，按照從標(biāo)準(zhǔn)品中獲得的平均吸光率和其相對(duì)應(yīng)的濃度值，繪制一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3) 利用樣品的平均吸光率，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出其相應(yīng)的濃度值，

4) 自動(dòng)方法：使用計(jì)算機(jī)三次方模式﹑四參數(shù)模式或雙對(duì)數(shù)函數(shù)的計(jì)算機(jī)程序可得到結(jié)果。

5) 樣品的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接獲取。樣品的濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)品的濃度則需進(jìn)一步稀釋。在計(jì)算濃度的時(shí)候，要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。

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